摘要：建立了工业上用高效液相色谱法来监控合成3-氨基吡啶反应。使用ZORBAX Eclipse XDB-C18柱（250mm×4.6 mm id；5um）流动相为PH2.5水和乙腈。流速为1ml/min，柱温为35℃，检测波长为260nm。在此条件下烟酰胺烟酸和3-氨基吡啶在浓度为2到200mg/l时与色谱峰面积值呈良好的线性关系，回归系数均在0.9999以上。烟酰胺、烟酸和3-氨基吡啶相对标准偏差（n=6）为0.335%、0.208%和0.174%。加标回收率在91.7～109.6%。此方法简单、快速、准确，用于工业上监控合成3-氨基吡啶反应。

关键词 高效液相色谱；3氨基吡啶；合成；烟酰胺；烟酸

Abstract : A high performance liquid chromatography (HPLC) method for the monitoring of 3-aminopyridine synthesis reaction in Industry. The separation was performed on C18 column

(250mm×4.6 mm id；5um ) with acn-water ( 0∶100，v / v) as the mobile phase at a flow rate of 1m L / m in and the temperature was 35 ℃.

The detection wavelength was set at 260nm and the sample injection volume was 10 μL.

There were good linear relationships between the mass concentration and the peak areas of 3-aminopyridine, nicotinic acid and nicotinamide in the ranges of 2-200 mg /L. The relative standard deviations ( RSD％，n = 6 ) of 3-aminopyridine, nicotinic acid and nicotinamide were 0.335%、0.208%和0.174%. The detection limit of Nicotinamide were 0.043mg/L , 0.052 mg/L , 0.061 mg/L.

The recoveries of were 91. 7% ～109. 6%.This method is rapid，simple and suitable for the monitoring of

3-aminopyridine synthesis reaction in Industry.

Key words：high pressure liquid chromatography（hplc）; 3-aminopyridine

nicotinic acid ; nicotinamide;

1. 引言

3-氨基吡啶是重要的有机化工中间体，市场应用前景广阔，主要用于合成医药、农药、染料等重要的化工产品。它在医药，农药，染料，催化化学，物理化学等许多方面着重要而广泛的用途。

3-氨基吡啶(3-AP)合成所得的6一氮杂吲哚类化合物对人体内的致活酶具有抑制作用，以此可以用于糖尿病和炎类疾病的治疗(1)；3-AP也可以作为起始原料制备1，5-2氮杂萘羧酰胺类化合物，对HIV整合酶具有抑制性，可控制HIV病毒的复制，因此可以对艾滋病有预防和治疗的药效作用(2)。此外，3-AP还能制备合成血小板集合体抑制剂，治疗局部缺血[3]”；由3-AP合成所得的与烟碱相关类化合物对烟碱摄取具有调节作用，可用于肺癌的防治(4)。

3-AP在农业方面，可以合成杀虫剂，应用于"稻谷、麦秸地中效果显著（5），也是杀菌剂粉消宁的合成原料，用于防治蔬菜、豆类、果蔬的白粉病（6）；3-AP还可作为染料制各的中间体，参与合成对聚酯光纤有染色作用的有机化合物（7）。

工业上3一氨基吡啶以烟酰胺为主要原料，经霍夫曼降解而得。此反应产率可以达到为93％。

此路线简单，有比较高的工业应用价值。此合成路线周期简短，原料廉价易得，工艺操作简便，反应条件温和，具有较高的工业应用价值。因此对合成3一氨基吡啶的监控十分重要，包括霍夫曼反应终点、萃取终点、废水中残留等等。

目前，烟酰胺和烟酸的测定方法已有相关文献报道（8-11），而同时测定烟酰胺和3-氨基吡啶的方法却未见报道。为此，本文建立了一种运用适用于高效液相色谱法同时定量检测工业生产中烟酰胺、烟酸和3一氨基吡啶含量的方法，即高效液相色谱法监控合成3一氨基吡啶反应。

2. 实验部分

2.1仪器、试剂

Agilent 1200高效夜想色谱仪，包括在线脱气装置、四元泵、柱温箱及二极管阵（DAD）列检测器。

分析天平（0.0001g）；PH酸度计（METTLER TOLEDO 320），超声仪，过滤膜（0.45um）

3-氨基吡啶（99%，Acros），烟酰胺（SUPELCO）烟酸（SUPELCO）

乙腈（HPLC，CNW）

H3PO4 (HPLC,85%,TEDIA)

水为超纯水，电阻率为18.2 MΏ·cm

2.2 色谱条件

色谱柱ZORBAX Eclipse XDB-C18 （250mm×4.6 mm id：5um）

流动相：乙腈和PH为2.5的水（用H3PO4调至）

流速：1 ml /min

DAD检测器波长：260nm

进样量：10ul

柱温：35℃

2.3 标准品溶液的配制

分别配制浓度为2，20，50，100，200mg/l的混合标样，按上述条件依次进样。见下表1

表1 混合标样品的浓度

2.4 样品的称量

称取200mg（精确至0.0001g）样品到50ml容量瓶中，用PH2.5的水稀释至刻度，超声冷却至室温进0.45um过滤得样品溶液。

浓缩蒸馏反应液：称取100mg（精确至0.0001g）样品到50ml容量瓶中，移取5ml溶液到50ml容量瓶种，用PH2.5的水稀释至刻度，超声冷却至室温进0.45um过滤得样品溶液。

3.  结果与讨论

3．1条件的优化

3.1.1检测波长的确定

用二极管阵列检测器在190~400nm进行扫描，得到紫外吸收光谱图，烟酰胺和烟酸在 260nm附近有最大吸收（参见图1和图2），3一氨基吡啶在210和260nm附近有最大吸收（参见图3 ），而考虑到乙腈在260nm无吸收波长，综合考虑基线、峰形、信号相应强弱等情况，选择检测波长为260nm。

图1 烟酰胺的紫外吸收光谱

图2 烟酸的紫外吸收光谱

图3  3-氨基吡啶的紫外吸收光谱

3.1.2 流动相的选择

根据溶剂的强度、溶解度、极性和粘度等因素对HPLC分离的影响，分别考察了甲醇-水和乙腈-水组成的流动相对分离的影响。结果表明，乙腈-水的体系粘度比甲醇小，对机器压力的影响较小，故采用乙腈-水作为流动。

另外考察了不同比列的乙腈-水溶液对分离效果的影响。实验发现，当流动相中乙腈的比列降低时，组分的保留时间明显延长，能较好地分离（见图4和图5）。故采用100% pH2.5水等梯度洗脱。在上述选定的条件下，为了改善峰形，对分离条件进行了进一步的优化，考察了在流动相中添加pH值。实验发现，在流动相中加入少许磷酸缓冲液效果好，并控制pH值为2.5能提高峰的对称性和节省分析时间。(见图6)

图4   流动相中含30%的ACN标样分离色谱图

图5   流动相中含10%的ACN标样分离色谱图

图6   流动相中不含ACN标样分离色谱图

图7  流动相为2.5水标样的分离色谱图

3.1.3流速的选择

流速过快，造成分离效果不好，压力过大；流速过慢，分析时间将延长。综合考虑快速检测和分离效果，确定流动相流速为1ml/min.

3.2 标准曲线的绘制

精密量取配置好的混合标准溶液依次进样, 以峰面积（Area） 为纵坐标标准液质量浓度（Amount）为横坐标建立标准工作曲线(见图8-图10)，在此条件下烟酰胺烟酸和3-氨基吡啶在浓度为2到200mg/l时与色谱峰面积值呈良好的线性关系，回归系数均在0.9999以上。见下表2

表2 混合标样的线性方程和回归系数

图8 3-氨基吡啶的标准工作曲线

图9 烟酸的的标准工作曲线

图10 烟酰胺的标准工作曲线

3.3 精密度实验

吸取质量浓度均为20mg /L的混合标准溶液，重复进样6次，记录色谱图，测定峰面积，计算其3-氨基吡啶、烟酰胺、烟酸的相对标准偏差RSD依次为0.174%、0.355%和0.208%。

3.4 方法检出限

在上述实验条件下，以信噪比(S/N) 为3计算出3-氨基吡啶、烟酰胺、烟酸的检出限，依次为0.043mg/L，0.052 mg/L ，0.061 mg/L 。

3.5 样品分析及回收率

在上述实验条件下分别测定了霍夫曼反应终点、萃取终点、废水中残留、蒸馏后反应液四步系列的样品(见图)，平行测定3次，结果见下表3-表6

图11 霍夫曼反应终点样品色谱图

图12 萃取终点终点样品色谱图

图13 废水中残留样品色谱图

图14 蒸馏后反应液样品色谱图

表3 霍夫曼反应终点样品测定结果及RSD%

表4 萃取终点终点样品测定结果及RSD%

表5 废水中残留样品测定结果及RSD%

表6 蒸馏后反应液样品测定结果及RSD%.

通过对上述四个系列的样品在不同浓度水平上加标，回收率最低为91. 7 %，最高为109.6 %。说明本方法是具有较好准确度的，结果见下表7

表7 样品的添加回收率

4. 结语

建立了用高效液相色谱法同时定量测定工业生产中3一氨基吡啶、烟酰胺和烟酸的含量。将方法用于工业上实际样品分析，检出限为0.043mg/L，0.052 mg/L ，0.061 mg/L，加标回收率为91.7～109.6%。该测定方法具有准确、简单、快速等优点，用于工业上监控合成3一氨基吡啶反应。

5  参考文献

1.Horiguchi Y.Imoto H.Wolf M A Preparation of 6-azaindoles as IkB kinase inhibitors for treating diabetes and inflammatory diseases 2005

2.Johns B A.Boros E E.Kawasuji T Preparation of naphthyridinecarboxamides as HIV integrase inhibitors 2005

3.Kanaya N.Ishiyama T.Muto R Preparation of pyrazole carboxamide derivatives as platelet aggregation

inhibitors for treatment of ischemia 2005

4.Cashman J R Preparation of nicotine-related compounds as modulators of smoking or nicotine

ingestion and lung cancer 2005

5.Knox I L.Rogers R B Preparation of (1H-1,2,3-triazol-1-yl)pyridines as insecticides 1988

6.钟一德3-氨基吡啶 1992(06)

7.Lord M W.Peters A T New intermediates and dyes for synthetic fibers. Ⅵ.1-(Arylamino)anthraquinones 1973(20)

8．王春天，戴洋洋，闫磊，张延超，马文红，郑维君乳饮料中烟酸和烟酰胺的液相色谱检测方法 食品研究与开发2011 32（4）：148

9．罗浇燕，周洪伟，林玉娜快速测定食品中烟酰胺维生素B1B5含量[J].

中国卫生检验杂志,2005（6）

10．GB T5413.15-2010婴幼儿食品和乳品中烟酸和烟酰胺的测定

11．GB T5009.197-2003 保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定

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